作者voen (新的开始~加油吧)
看板Biotech
标题[求救] 限制酶截切没有band
时间Fri May 9 22:57:26 2008
想请教各位
我把欲cloned的基因和pET21a进行ligation
隔天挑点作colony PCR
有出现目标band
再将那些点养菌抽质体
可是之後进行限制酶作用 却都没有出现我要的band
做了三次都出现这个问题
不知道该怎麽办 0rz
请教各位了 谢谢回答 <(_ _)>
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不要小看自己
因人有无限可能
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.234.138
1F：推 frandt:可以试看看直接取colony做PCR看P不P得出来 05/09 23:31
2F：推 dankai:拿酵素去切其他DNA 看能不能切 05/09 23:39
3F：推 chvkimo:楼上 应该是要测试你的enzyme有没有坏掉 right? 05/10 22:20
4F：推 yaliu:如果enzyme没坏，可是又切不出来...会不会其实你P出来不是 05/11 01:34
5F：→ yaliu:你想的目标基因....只是恰巧被你的primer P到而已.... 05/11 01:34
6F：→ ppppai:有查NEB看你的限制酶有无特殊note? 05/14 17:05
7F：→ ppppai:之前我有切不动的情形是因为plasmidDNA在细菌中太旧才抽出 05/14 17:05
8F：→ ppppai:导致可能被甲基化，所以切不动，再把DNA重新transform重抽 05/14 17:06
9F：→ ppppai:就不会了 05/14 17:06
10F：→ ppppai: 久 (错字) 05/14 17:07
11F：→ ppppai:注: 太久= transform菌养2ml离心後直接冻-20超过一个月後抽 05/14 17:09