作者hungte0928 (Damon)
看板Biotech
標題[方法]幫個忙看一下~~純化protein
時間Mon May 5 18:47:29 2008
現在都在進行蛋白質純化的進度
可是binding到我要的protein少之又少= =
這讓我很困擾
我的作法是先將我要看的序列轉到BL21上面
利用它大量產生protein
養好小量後lysate
用sepharosre去binding我要的fusion protein
用PBS洗了幾次後再用elution buffer
從beads上洗下來我要的
可是每次跑SDS-PAGE都看不到我要的band.....救命ㄚ= =
有人有更好的方法可以告訴我嗎??
或者要注意的地方~~~感恩阿!!!
p.s.是不是在buffer裡加DTT會比較好一點@@
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◆ From: 123.193.123.117
1F：→ hosaile:我不是要給建議啦 是想問一下 wash beads用PBS對嗎? 05/05 21:24
2F：→ hosaile:不是應該要用特定salt濃度的wash buffer? 05/05 21:25
3F：推 liuse:回樓上 一般condition用PBS 是可以的 05/05 21:29
4F：→ rivis:問題沒頭沒尾的，表現量？Tag?不同原因有不同解決方法..... 05/06 11:50