作者hungte0928 (Damon)
看板Biotech
标题[方法]帮个忙看一下~~纯化protein
时间Mon May 5 18:47:29 2008
现在都在进行蛋白质纯化的进度
可是binding到我要的protein少之又少= =
这让我很困扰
我的作法是先将我要看的序列转到BL21上面
利用它大量产生protein
养好小量後lysate
用sepharosre去binding我要的fusion protein
用PBS洗了几次後再用elution buffer
从beads上洗下来我要的
可是每次跑SDS-PAGE都看不到我要的band.....救命ㄚ= =
有人有更好的方法可以告诉我吗??
或者要注意的地方~~~感恩阿!!!
p.s.是不是在buffer里加DTT会比较好一点@@
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 123.193.123.117
1F：→ hosaile:我不是要给建议啦 是想问一下 wash beads用PBS对吗? 05/05 21:24
2F：→ hosaile:不是应该要用特定salt浓度的wash buffer? 05/05 21:25
3F：推 liuse:回楼上 一般condition用PBS 是可以的 05/05 21:29
4F：→ rivis:问题没头没尾的，表现量？Tag?不同原因有不同解决方法..... 05/06 11:50