作者diamondcrazy ()
看板Biotech
標題[求救] 通完column以後protein量變超少...
時間Wed Apr 9 16:51:09 2008
最近在做protein induction
我的方法是把protein的N端接上Histag然後再跟Ni-NTA agarose(Quagen)結合
再用一系列特定濃度的imidazole將protein洗下來
可是不曉得為什麼 我通完column以後跑SDS-PAGE觀察
發現跟還沒通column之前的位置有所差異
我的蛋白質大約是22KD左右 用Bio-Rad prescision plus prtein Marker來看
發現在通column之前大約比20KD上面一點點，但是通完column以後
sample的位置卻超過了25KD,比25KD還要上面一些
搞不太懂為什麼會出現位置改變的情形咧？
ps:跑western兩個結果都可以被抗體抓到
另外，再請教一個問題
Ni跟Ni-NTA有沒有一樣啊？
因為之前看到板友PO關於用Hist tag把蛋白質抓下來的問題
說Ni在通完column以後會從藍色變白色
那麼Ni-NTA是不是也會變顏色呢？
因為我通完顏色都沒變
我還遇到一個問題就是通column前後的濃度變超低 不知道是不是跟Ni-NTA有關
麻煩請求板上前輩給予指導
也請包涵我對於實驗概念跟慣用語言的不熟悉，所以在表達上有點不流暢
(到現在有時候仍會聽不懂學姐跟業務討論實驗問題時的內容...)
謝謝 <(_ _)>
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◆ From: 192.192.90.35
1F：推 ROKEE:會變白色應該是EDTA去抓Ni.... 04/09 18:38
2F：推 CHHO:分子量有所差異有沒有可能是蛋白質所在的Buffer的鹽度或pH值 04/09 20:07
3F：→ CHHO:不同所致呢~~ 04/09 20:10
4F：→ diamondcrazy:會差到3kD這麼多嗎？ 04/16 11:28
5F：推 CHHO:只是純猜測阿~~但不知對不會這樣?? 04/17 19:47