作者diamondcrazy ()
看板Biotech
标题[求救] 通完column以後protein量变超少...
时间Wed Apr 9 16:51:09 2008
最近在做protein induction
我的方法是把protein的N端接上Histag然後再跟Ni-NTA agarose(Quagen)结合
再用一系列特定浓度的imidazole将protein洗下来
可是不晓得为什麽 我通完column以後跑SDS-PAGE观察
发现跟还没通column之前的位置有所差异
我的蛋白质大约是22KD左右 用Bio-Rad prescision plus prtein Marker来看
发现在通column之前大约比20KD上面一点点，但是通完column以後
sample的位置却超过了25KD,比25KD还要上面一些
搞不太懂为什麽会出现位置改变的情形咧？
ps:跑western两个结果都可以被抗体抓到
另外，再请教一个问题
Ni跟Ni-NTA有没有一样啊？
因为之前看到板友PO关於用Hist tag把蛋白质抓下来的问题
说Ni在通完column以後会从蓝色变白色
那麽Ni-NTA是不是也会变颜色呢？
因为我通完颜色都没变
我还遇到一个问题就是通column前後的浓度变超低 不知道是不是跟Ni-NTA有关
麻烦请求板上前辈给予指导
也请包涵我对於实验概念跟惯用语言的不熟悉，所以在表达上有点不流畅
(到现在有时候仍会听不懂学姐跟业务讨论实验问题时的内容...)
谢谢 <(_ _)>
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◆ From: 192.192.90.35
1F：推 ROKEE:会变白色应该是EDTA去抓Ni.... 04/09 18:38
2F：推 CHHO:分子量有所差异有没有可能是蛋白质所在的Buffer的盐度或pH值 04/09 20:07
3F：→ CHHO:不同所致呢~~ 04/09 20:10
4F：→ diamondcrazy:会差到3kD这麽多吗？ 04/16 11:28
5F：推 CHHO:只是纯猜测阿~~但不知对不会这样?? 04/17 19:47