作者LIAR (墮天使)
看板Biotech
標題[閒聊] 請問有加SDS的tris buffer為什麼會不好滴定？
時間Fri Mar 28 22:10:35 2008
western有很多buffer，我的老師（別的實驗室）要求他的學生所有buffer自己配，
連老師自己也是自己配，所以我也是自己google後自己配，不過光只有tris的話還
好，用HCl滴定沒問題。
但只要有加SDS，pH meter就變得很不敏感，雖然有攪拌，但明明滴了不少HCl，
但pH meter卻沒變化，把pH meter拿起來重新用dd H2O水沖過再重測才會看到變化，
而且很快又會定住，所以一直定不準。
老師說tris直接定好再加SDS也可以，不過我想說最後pH比較準，而且加一堆東西後
會不會改變pH也不曉得，我的配方也是最後才加一句
"check the pH and bring it to pH 6.8"
所以想請問有人滴定過含SDS的buffer遇過我這種問題嗎？請問怎麼解決呢？
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太初有道，道與耶和華同在，道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。
萬物乃藉祂所造，凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭，
這生命就是人的光。光照在黑暗裡，黑暗卻不接受光。
吾輩乃生於黑暗，行於黑暗。因神之指引，行向光明；又因撒旦誘惑，回歸黑暗。
我不斷地徘徊於光明與黑暗之間，從被造之日至今，又自今直到那審判之日的來臨。
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◆ From: 123.192.3.78
1F：推 runpapa0520:TRIS有出專用的PH meter 貴很多，聽說比較準，我沒用 03/28 22:21
2F：→ LIAR:光tris還要用專用pH meter啊？不是只要溫度補償就好？ 03/28 22:26
3F：→ runpapa0520:我用一般的定也不會像你一樣 最多幅度跳動點大 03/28 22:23
4F：推 aggaci:western blot什麼buffer需要加SDS而且還要調pH值的？ 03/28 22:43
5F：→ LIAR:sample buffer、running buffer、transfer... 03/28 22:44
6F：→ LIAR:我的不是跳動有點大，是根本不跳嘛！沒SDS就沒問題。 03/28 22:45
7F：推 aggaci:不需要調吧？至少我沒調過，也沒聽說過(你是第一個) 03/28 22:47
8F：→ LIAR:怎麼會有SDS-PAGE不用調pH啊？ 03/28 22:52
9F：推 blence:Tris buffer主要的目的要穩定pH(所以才叫buffer阿),因此只 03/28 23:00
10F：→ blence:需要在準備stock時調好pH就好,不需要配好後又時時刻刻調pH 03/28 23:02
11F：推 ROKEE:推樓上，Tris本來就是緩衝用的 03/28 23:05
12F：→ blence:一般實驗室就會準備pH6.8~8.5的Tris-HCI的stock備用,或者以 03/28 23:06
13F：→ blence:HEPES-KOH做類似功能的替代 03/28 23:09
14F：→ LIAR:不過有些buffer的tris很稀，這樣先調好的不會被其他成份 03/28 23:41
15F：→ LIAR:加進去後而改變嗎？ 03/28 23:42
16F：推 alaric:我實驗室的,都是加一加藥,定量體積,攪一攪全溶, 就可以. 03/29 00:01
17F：→ alaric:好久沒測pH值.. 03/29 00:02
18F：→ LIAR:所以alaric也是有各種pH的TRIS配好stock囉？ 03/29 00:03
19F：推 limyeeshin:我是調好pH才加SDS欸 目前為止跑起來沒問題 03/29 01:40
20F：推 tsubasawolfy:配Tris buffer沒在加SDS(8.8 and 6.8) 做膠時才另外 03/29 08:24
21F：→ tsubasawolfy:加入10%SDS buffer 而且量很稀 我是覺得不會變動到 03/29 08:24
22F：→ tsubasawolfy:pH EX:TRIS體積3.8ml:10%SDS體積150uL 03/29 08:25
23F：推 allure1:Tris先定好 就把藥加一加+1 03/29 17:31
24F：推 naturer:用試紙阿...:P 03/29 17:39