作者apoptosis (good job)
看板Biotech
標題[求救] real time PCR variation 很大(同sample)
時間Wed Mar 19 12:14:09 2008
最近作real time遇到困難
我的問題是這樣
1.primer + mixture 也有大約20~30 cycle, 我懷疑污染 就去跑膠
run gel發現有加cDNA的有兩條BAND,
一條在100bp 是我的產物 另一條在約50bp 我懷疑是primer dimer.
如果不加cDNA 就沒有100bp那條 只有50bp
現在不知道要怎辦 只能redesign primer嗎?
如下圖
M cDNA+primer primer only
一
一
一
一
一
一 一
一 一
2.我的variation非常大 大概會有3~5個cycle(同一個sample)
不知道是不是就是primer dimer造成的.
現在一頭霧水 請教大家 謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 76.182.57.0
※ 編輯: apoptosis 來自: 76.182.57.0 (03/19 12:14)
1F：推 meiosisLin:primer序列可否PO 一下 03/19 12:44
2F：推 xcvbnm:primer dimer應該是一團霧霧的吧@@~~你50bp的band很清楚? 03/19 13:35
3F：推 zoom8080:melting curve如何? 03/19 13:41
4F：推 qqo8855436:PRIMER濃度降低試看看 03/19 18:13
5F：→ qqo8855436:亮外...是哪一家的機型呢?? 03/19 18:14