作者mournermind (阿矇)
看板Biotech
標題請問一個關於蛋白純化的問題
時間Thu Feb 14 17:23:20 2008
在看過後我看到有板大提出gradient elution的方法
想請問一下在怎樣的情況下須要做gradient elution?
他的方法大概是怎樣?起始imidazole濃度大概要多少
另外wash buffer的量要多少呢?
另外想請問一下各位板大 在Novagene的純化手冊上
以及之前曾聽說過在elution時所使用的imidazole濃度為100mM~250mM
想請問為何etlute buffer的濃度是一個範圍而不是直接選擇最高的濃度進行
elution的動作呢?
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◆ From: 140.113.55.220
1F：推 bluecsky:一切都是case by case..你要先不停的用少量去測試條件 02/14 19:56
2F：→ bluecsky:抓好一個最恰當的條件就可以了..當然你純化目的不同也 02/14 19:57
3F：→ bluecsky:會有不同的需求..起始imidazole用10~20 mM試試 02/14 19:57
4F：→ bluecsky:接者可以試40 80..大多100多就都流光了..也有到250 02/14 19:58
5F：→ bluecsky:wash的量一樣要自己抓..可以先試試4倍column體積 02/14 19:59
6F：→ bluecsky:不夠乾淨就再洗多一點..就是這樣..一步一步去找條件吧 02/14 19:59
7F：→ bluecsky:我說的10~20 40 80是wash的..elution從100開始吧.. 02/14 20:00
8F：→ bluecsky:elution也可以直接都用最高的條件去洗..只是有的很神奇 02/14 20:00
9F：→ bluecsky:100被洗出來..250洗不太出來(我聽人說的)..一切都是謎阿 02/14 20:01
10F：→ mournermind:感激T.T 02/15 00:31
11F：推 pei9:我們實驗室是用500~~~哈哈哈哈!!!可以去參考一些論文應該有幫 03/03 21:53
12F：→ pei9:助!!! 03/03 21:54