作者mournermind (阿蒙)
看板Biotech
标题请问一个关於蛋白纯化的问题
时间Thu Feb 14 17:23:20 2008
在看过後我看到有板大提出gradient elution的方法
想请问一下在怎样的情况下须要做gradient elution?
他的方法大概是怎样?起始imidazole浓度大概要多少
另外wash buffer的量要多少呢?
另外想请问一下各位板大 在Novagene的纯化手册上
以及之前曾听说过在elution时所使用的imidazole浓度为100mM~250mM
想请问为何etlute buffer的浓度是一个范围而不是直接选择最高的浓度进行
elution的动作呢?
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.113.55.220
1F：推 bluecsky:一切都是case by case..你要先不停的用少量去测试条件 02/14 19:56
2F：→ bluecsky:抓好一个最恰当的条件就可以了..当然你纯化目的不同也 02/14 19:57
3F：→ bluecsky:会有不同的需求..起始imidazole用10~20 mM试试 02/14 19:57
4F：→ bluecsky:接者可以试40 80..大多100多就都流光了..也有到250 02/14 19:58
5F：→ bluecsky:wash的量一样要自己抓..可以先试试4倍column体积 02/14 19:59
6F：→ bluecsky:不够乾净就再洗多一点..就是这样..一步一步去找条件吧 02/14 19:59
7F：→ bluecsky:我说的10~20 40 80是wash的..elution从100开始吧.. 02/14 20:00
8F：→ bluecsky:elution也可以直接都用最高的条件去洗..只是有的很神奇 02/14 20:00
9F：→ bluecsky:100被洗出来..250洗不太出来(我听人说的)..一切都是谜阿 02/14 20:01
10F：→ mournermind:感激T.T 02/15 00:31
11F：推 pei9:我们实验室是用500~~~哈哈哈哈!!!可以去参考一些论文应该有帮 03/03 21:53
12F：→ pei9:助!!! 03/03 21:54