作者reteporeh (颱風也喜歡放假)
看板Biotech
標題切膠回收做PCR
時間Thu Jan 3 14:35:46 2008
想請問板上的各位
有將PCR產物做膠回收然後再進行PCR嗎?
目前遇到的情形是
膠回收完的產物再進行相同條件PCR時
在跑膠確認時,沒有看到任何的band
重複做過幾次,情形依然
想請問在做完膠回收後
再進行PCR時
有什麼條件特別要求的嗎?
PS..膠回收是使用Kit做的
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.130.98.139
1F：推 sGoat:請問這樣有意義嗎,為何不拿產物稀釋式之後再跑一次? 01/03 14:55
2F：推 mandible:有吧.他可能想用膠分離想要的產物吧. 01/03 15:41
3F：推 zoom8080:有時後第一次p太少，就要純化p第2次 01/03 15:58
4F：推 soda0:要增加PCR的片段以及確認產物的完整性，通常是primer設計上 01/03 23:32
5F：→ soda0:有加入限制酶切位，為了確定切位的sequence有接上 01/03 23:34
6F：→ soda0:原PO的情形可能在回收的時候產生lost，在回收後先確認產物 01/03 23:36
7F：推 rangelovero:你的情形我遇過~之前作overlap PCR 時 跑出的band約 01/05 12:40
8F：→ rangelovero:三條 為了得到我要的片段就將它回收後再跑一次 01/05 12:42
9F：→ rangelovero:總覺得理論上就拿得到我要的major band~不過從來沒成 01/05 12:43
10F：→ rangelovero:功過。全都是smear 我猜測可能產物真的太雜了 01/05 12:44