作者reteporeh (台风也喜欢放假)
看板Biotech
标题切胶回收做PCR
时间Thu Jan 3 14:35:46 2008
想请问板上的各位
有将PCR产物做胶回收然後再进行PCR吗?
目前遇到的情形是
胶回收完的产物再进行相同条件PCR时
在跑胶确认时,没有看到任何的band
重复做过几次,情形依然
想请问在做完胶回收後
再进行PCR时
有什麽条件特别要求的吗?
PS..胶回收是使用Kit做的
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.130.98.139
1F：推 sGoat:请问这样有意义吗,为何不拿产物稀释式之後再跑一次? 01/03 14:55
2F：推 mandible:有吧.他可能想用胶分离想要的产物吧. 01/03 15:41
3F：推 zoom8080:有时後第一次p太少，就要纯化p第2次 01/03 15:58
4F：推 soda0:要增加PCR的片段以及确认产物的完整性，通常是primer设计上 01/03 23:32
5F：→ soda0:有加入限制酶切位，为了确定切位的sequence有接上 01/03 23:34
6F：→ soda0:原PO的情形可能在回收的时候产生lost，在回收後先确认产物 01/03 23:36
7F：推 rangelovero:你的情形我遇过~之前作overlap PCR 时 跑出的band约 01/05 12:40
8F：→ rangelovero:三条 为了得到我要的片段就将它回收後再跑一次 01/05 12:42
9F：→ rangelovero:总觉得理论上就拿得到我要的major band~不过从来没成 01/05 12:43
10F：→ rangelovero:功过。全都是smear 我猜测可能产物真的太杂了 01/05 12:44