oopa: 如果方便可以提供你是用哪種組織及blocking的條件,會比較 12/27 oopa: 容易找問題,或許有些人有類似的經驗 oopa: background可能來自組織本身的biotin,此時就要從blocking著手 everything47: 你的組織本身就有顏色嗎? 會不會是過染了? everything47: 如果是過染 把一抗的比例調低試試 roddic: 你有做antigen unmasking嗎? ------------------------------------------------------------------------ 真的感謝各位前輩的指教， 我用的是心臟組織，目前blocking的條件是1%的PBA於室溫下一小時， 而且另外在一抗前，還用一個comercial的power blocking reagent做blocking， 至於組織本身顏色的問題，心臟組織我目前染的感覺，在螢光顯微鏡下， 不同濾鏡片，也會呈現不同顏色， 至於在光學顯微鏡下，我到覺得沒啥顏色就是， biotin的問題，其實我不太懂，但是該做的步驟我都有， 像是H202的quench，這方面我不熟悉，所以我不知道會不會有什麼影響 另外，antigen unmasking我是有做的，我是以10mM的sodium citrate， 以隔水加熱法，於沸水中作用20分鐘， 不過冷卻的動作我倒是挺隨性，煮完我就直接泡在PBS了，不知道這樣會不會有影響 過染的問題，我比較好奇的是，各位前輩在做DAB染色時， 當加入DAB reagent後，都可以在30秒內， 整個組織切片，會用肉眼就可以看到明顯的變成紅褐色嗎？ 因為我目前有這樣的狀況。 抱歉，敘述的不是很好，不知道各位前輩在做DAB時， 最後在染核時，是用什麼染劑， 以及染完後，是否整個組織顏色都會變成此染劑的背景色 謝謝各位喔 m(_ _)m --

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