oopa: 如果方便可以提供你是用哪种组织及blocking的条件,会比较 12/27 oopa: 容易找问题,或许有些人有类似的经验 oopa: background可能来自组织本身的biotin,此时就要从blocking着手 everything47: 你的组织本身就有颜色吗? 会不会是过染了? everything47: 如果是过染 把一抗的比例调低试试 roddic: 你有做antigen unmasking吗? ------------------------------------------------------------------------ 真的感谢各位前辈的指教， 我用的是心脏组织，目前blocking的条件是1%的PBA於室温下一小时， 而且另外在一抗前，还用一个comercial的power blocking reagent做blocking， 至於组织本身颜色的问题，心脏组织我目前染的感觉，在萤光显微镜下， 不同滤镜片，也会呈现不同颜色， 至於在光学显微镜下，我到觉得没啥颜色就是， biotin的问题，其实我不太懂，但是该做的步骤我都有， 像是H202的quench，这方面我不熟悉，所以我不知道会不会有什麽影响 另外，antigen unmasking我是有做的，我是以10mM的sodium citrate， 以隔水加热法，於沸水中作用20分钟， 不过冷却的动作我倒是挺随性，煮完我就直接泡在PBS了，不知道这样会不会有影响 过染的问题，我比较好奇的是，各位前辈在做DAB染色时， 当加入DAB reagent後，都可以在30秒内， 整个组织切片，会用肉眼就可以看到明显的变成红褐色吗？ 因为我目前有这样的状况。 抱歉，叙述的不是很好，不知道各位前辈在做DAB时， 最後在染核时，是用什麽染剂， 以及染完後，是否整个组织颜色都会变成此染剂的背景色 谢谢各位喔 m(_ _)m --

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