※ 引述《ad1980 (Apoptosis)》之銘言： : 想問板上有沒有人用過這個kit。 : 我家的是用Pfx PCR 過後，直接拿pcr product : 用TOPO ZeroBlunt，但是呢... : 實驗室的人，不是全都是false positive， : 有 colonies 沒insert， : 就是一個colonies都沒有， : 老闆問了廠商之後，他們說可能是kit又問題， : 就送了一個新的來， : 可是還是一樣的問題， : 後來老闆買了新的enzyme再試， : 結果一樣。 : 老闆說：This is weird, I really dont know what's wrong with it. : 當然我也遇到一樣的問題， : 但是比實驗室其他人幸運一點， : 長出來的唯二colonies有insert， : 我的labmate還在奮戰，所以想問大家有沒有遇過類似的問題， : 我不想以後還需要做cloning的時候， : 又遇到同樣的問題。 @@... : 如果有人知道問題所在， : 麻煩指點一下，感激不盡。 有時候會出現這種問題， 目前經驗是.. 第一，讓你的insert gene設計成不要插進去之後會跟vector上的sequence in-frame, 因為pBlunt設計的接入點，剛好把一個suide gene切開， 如果vector自己self-ligate菌會死掉長不起來，所以據說， 如果你的東西一直長不起來的話，可以在insert多加一或兩個nucleotide， 改變coding frame，可能會有用吧 第二，要小心使用competent cell，這點我自己沒遇過，可是有聽其他人說， kit有自己建議的competent cell，似乎不見的每一種都適合。。 以上，參考看看囉～～ --

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