※ 引述《ad1980 (Apoptosis)》之铭言： : 想问板上有没有人用过这个kit。 : 我家的是用Pfx PCR 过後，直接拿pcr product : 用TOPO ZeroBlunt，但是呢... : 实验室的人，不是全都是false positive， : 有 colonies 没insert， : 就是一个colonies都没有， : 老板问了厂商之後，他们说可能是kit又问题， : 就送了一个新的来， : 可是还是一样的问题， : 後来老板买了新的enzyme再试， : 结果一样。 : 老板说：This is weird, I really dont know what's wrong with it. : 当然我也遇到一样的问题， : 但是比实验室其他人幸运一点， : 长出来的唯二colonies有insert， : 我的labmate还在奋战，所以想问大家有没有遇过类似的问题， : 我不想以後还需要做cloning的时候， : 又遇到同样的问题。 @@... : 如果有人知道问题所在， : 麻烦指点一下，感激不尽。 有时候会出现这种问题， 目前经验是.. 第一，让你的insert gene设计成不要插进去之後会跟vector上的sequence in-frame, 因为pBlunt设计的接入点，刚好把一个suide gene切开， 如果vector自己self-ligate菌会死掉长不起来，所以据说， 如果你的东西一直长不起来的话，可以在insert多加一或两个nucleotide， 改变coding frame，可能会有用吧 第二，要小心使用competent cell，这点我自己没遇过，可是有听其他人说， kit有自己建议的competent cell，似乎不见的每一种都适合。。 以上，参考看看罗～～ --

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