※ 引述《xmanxpower (188)》之銘言： : 我是利用pPICZalphaC為載體以及SMD1168H為宿主 : 我要表現蛋白酶 : 問題一、 : 我看protocol上說明 : 當要表現重組蛋白時 : 菌要先活化到OD600=2~6 : 然後離心去除上清液後 : pellet要用broth回溶至OD600=1 : 然後培養 : 我想問回溶到OD600=1是怎麼做的？？這一步驟 就是M1*V1=M2V2的道理阿 這樣的目的是洗菌 也避免養份被耗光的medium中的雜質,去影響subculture後的新菌 : 還需要注意啥事項嗎？ : 問題二、 : 在培養後 : 每24小時都要添加甲醇誘導 : 請問一下甲醇添加的量可以過量嗎？我有看過加到2％ : protocol是寫添加到final conc.為0.5% 自己先試生長條件吧 例如誘導的methanol量和總誘導時間 甚至是medium中各成份含量 在NCBI打一下就很多protocol可以參考 : 問題三、 : 在培養Pichia時 : 請問1 Liter的三角搖瓶最多裝多少broth? : 搖瓶底部是有凹槽？還是平底的就好？ Pichia是絕對需氧菌,當然有凹槽最好 另外medium的量建議為flask容量的1/6以下 寧願小量多瓶也不要雞蛋放同個籃子裡 : 謝謝 : 可直接回信到我的ID : 感恩 -- 當兵半年笨很多耶... 打字都要想半天 --

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