※ 引述《xmanxpower (188)》之铭言： : 我是利用pPICZalphaC为载体以及SMD1168H为宿主 : 我要表现蛋白酶 : 问题一、 : 我看protocol上说明 : 当要表现重组蛋白时 : 菌要先活化到OD600=2~6 : 然後离心去除上清液後 : pellet要用broth回溶至OD600=1 : 然後培养 : 我想问回溶到OD600=1是怎麽做的？？这一步骤 就是M1*V1=M2V2的道理阿 这样的目的是洗菌 也避免养份被耗光的medium中的杂质,去影响subculture後的新菌 : 还需要注意啥事项吗？ : 问题二、 : 在培养後 : 每24小时都要添加甲醇诱导 : 请问一下甲醇添加的量可以过量吗？我有看过加到2％ : protocol是写添加到final conc.为0.5% 自己先试生长条件吧 例如诱导的methanol量和总诱导时间 甚至是medium中各成份含量 在NCBI打一下就很多protocol可以参考 : 问题三、 : 在培养Pichia时 : 请问1 Liter的三角摇瓶最多装多少broth? : 摇瓶底部是有凹槽？还是平底的就好？ Pichia是绝对需氧菌,当然有凹槽最好 另外medium的量建议为flask容量的1/6以下 宁愿小量多瓶也不要鸡蛋放同个篮子里 : 谢谢 : 可直接回信到我的ID : 感恩 -- 当兵半年笨很多耶... 打字都要想半天 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 218.164.138.53