作者mournermind (阿矇)
看板Biotech
標題[討論] 想請問PCR時遇到smear情況的原因
時間Wed Nov 28 17:47:40 2007
我最近開始用toyobo的polymerase作PCR
設定如下
95度 10分
95度30秒
55度30秒
72度01分
30cycles
72度10分
我的target長度1Kbp
template是細菌的genome 我抽出DNA後沒有稀釋直接取1micro
到100micro的反應系統裡
結果出現的都是亂七八糟的smear
我目前想到原因可能是template太濃 那還有其他原因可能smear嗎
像是TM太低之類的??
我有爬過文啦..可是沒得到想到的東西^^"
想問問有經驗的各位大人 ^^" 謝謝唷
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.113.55.220
※ 編輯: mournermind 來自: 140.113.55.220 (11/28 17:48)
1F：推 NKTcell:可能是TEMPLATE太濃 11/28 18:06
2F：推 enisx:同樓上看法! 不如先測一下genomic DNA濃度 稀釋後再做一次試 11/28 21:02
3F：推 meiosisLin:濃度過濃之外，考慮兩件事情.1phonel/Chloroform過一下 11/28 23:22
4F：→ meiosisLin:去除點蛋白質干擾，再者體積改成50 or 25體積小點... 11/28 23:23
5F：→ meiosisLin:體積縮小，PCR反應有時會好點 11/28 23:25
6F：推 boxiaokai:enzyme的說明書看了沒？請仔細看過照著上面建議做一次 11/29 01:57
7F：推 mournermind:喔喔好謝謝大家的建議^^我也會去看一下說明書!! 11/29 16:59