作者mournermind (阿蒙)
看板Biotech
标题[讨论] 想请问PCR时遇到smear情况的原因
时间Wed Nov 28 17:47:40 2007
我最近开始用toyobo的polymerase作PCR
设定如下
95度 10分
95度30秒
55度30秒
72度01分
30cycles
72度10分
我的target长度1Kbp
template是细菌的genome 我抽出DNA後没有稀释直接取1micro
到100micro的反应系统里
结果出现的都是乱七八糟的smear
我目前想到原因可能是template太浓 那还有其他原因可能smear吗
像是TM太低之类的??
我有爬过文啦..可是没得到想到的东西^^"
想问问有经验的各位大人 ^^" 谢谢唷
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.113.55.220
※ 编辑: mournermind 来自: 140.113.55.220 (11/28 17:48)
1F：推 NKTcell:可能是TEMPLATE太浓 11/28 18:06
2F：推 enisx:同楼上看法! 不如先测一下genomic DNA浓度 稀释後再做一次试 11/28 21:02
3F：推 meiosisLin:浓度过浓之外，考虑两件事情.1phonel/Chloroform过一下 11/28 23:22
4F：→ meiosisLin:去除点蛋白质干扰，再者体积改成50 or 25体积小点... 11/28 23:23
5F：→ meiosisLin:体积缩小，PCR反应有时会好点 11/28 23:25
6F：推 boxiaokai:enzyme的说明书看了没？请仔细看过照着上面建议做一次 11/29 01:57
7F：推 mournermind:喔喔好谢谢大家的建议^^我也会去看一下说明书!! 11/29 16:59