作者chengtachun (>0<)
看板Biotech
標題Re: [求救] 有關double digestion先後順序
時間Mon Nov 5 21:46:49 2007
※ 引述《leoblack (朋友看太重的猫)》之銘言：
: 如題
: 現在我想要作double digestion
: 所選用的RE分別是ApaI和XmaI
: 兩個特性都是用buffer 4 + BSA
: 但問題來了
: ApaI作用時需要在25℃,如果在37℃,則half-life為30分鐘
: 而XmaI作用所需溫度為正常的37℃
: 所以我想問~有沒有說先切溫度高的再切溫度低的這種建議?!
: (我是要2種RE分次切,並沒有要同時加在一起切)
: 個人第一個直覺是想先切溫度低的再切高的
: 這樣incubator溫度設定可以一路往上加,不用先加溫再降溫
: 好啦~我承認我真的有些龜毛^^"~
: 感謝了
我的看法是這樣,
先切XmaI@37℃,再補buffer+BSA跟ApaI,切ApaI@25℃
建議你看NEB的目錄說明然後跟其他人討論之後再決定
因為要看XmaI@25℃會不會出問題
給你我的經驗,切SfiI@50℃ in buf#2 + SalI@37℃ in buf#3
NEB的目錄上寫SfiI@37℃只有10%活性且在buf#3也只有10%活性
我的實驗室這樣做
1.先切SfiI@50℃ in buf#2 total 20uL (時間就自己決定)
2.補NaCl,Tris-HCl,BSA 把buf#2 total 20uL鹽濃度補成buf#3 total 30uL
3.補SalI切37℃
4.SfiI在buf#3@37℃還留有1%活性
參考看看
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※ 編輯: chengtachun 來自: 218.171.174.253 (11/05 23:07)
1F：推 leoblack:感謝~我會跟實驗室的人討論看看的^^~ 11/06 09:37