作者icebugs (說不完的故事)
看板Biotech
標題[求救] 想請問cloning～～已看過
時間Sat Nov 3 21:46:33 2007
最近在construst碰到了一些之前沒碰到的問題！
想請問一下！
insert size:6K
已接上pGEMT-Easy上，抽取maxi後，以RE digestion(double cut)，
有確認RE是有work的。作了gel extraction，
將insert切下，欲接入的vector size:5.4K
ligation insert:vector用-3:1
是用電的，也確認competent cell與transformation efficiency也ok，
至少都有10的9次方。
但是，在我有加ligase(promega)的組別中發現長出colone數目低於沒有加的，
所以，想知道是不是ligase會抑制colone生長，
同時，我還想check我的ligase是否有work。
所以現在想設計check的實驗，
打算利用single cut vector以有加入ligase and no liogase組別
transformation後，來check。
不知這樣是否足夠？
謝謝！
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 123.193.28.209
1F：推 JemmyTsai:ligase會影響transform效率(似乎molecular cloning說的) 11/04 10:50
2F：→ JemmyTsai:所以要減少抑制效果 可以heat inactivate or dilute 11/04 10:51
3F：→ JemmyTsai:由於效率較低 transformed cells數量少 所以clonies也少 11/04 10:52
4F：推 icebugs:感謝～～ 11/05 00:12
5F：推 konlon:maxi 太誇張了 11/18 18:52