作者icebugs (说不完的故事)
看板Biotech
标题[求救] 想请问cloning～～已看过
时间Sat Nov 3 21:46:33 2007
最近在construst碰到了一些之前没碰到的问题！
想请问一下！
insert size:6K
已接上pGEMT-Easy上，抽取maxi後，以RE digestion(double cut)，
有确认RE是有work的。作了gel extraction，
将insert切下，欲接入的vector size:5.4K
ligation insert:vector用-3:1
是用电的，也确认competent cell与transformation efficiency也ok，
至少都有10的9次方。
但是，在我有加ligase(promega)的组别中发现长出colone数目低於没有加的，
所以，想知道是不是ligase会抑制colone生长，
同时，我还想check我的ligase是否有work。
所以现在想设计check的实验，
打算利用single cut vector以有加入ligase and no liogase组别
transformation後，来check。
不知这样是否足够？
谢谢！
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 123.193.28.209
1F：推 JemmyTsai:ligase会影响transform效率(似乎molecular cloning说的) 11/04 10:50
2F：→ JemmyTsai:所以要减少抑制效果 可以heat inactivate or dilute 11/04 10:51
3F：→ JemmyTsai:由於效率较低 transformed cells数量少 所以clonies也少 11/04 10:52
4F：推 icebugs:感谢～～ 11/05 00:12
5F：推 konlon:maxi 太夸张了 11/18 18:52