吃光光.... 看到有人在討論immunofluorescence的一些細節 我也想來問問幾個我遇到的問題 因為我用的細胞是293T 原本就不會貼的很緊 用PBS就可以沖下來 我們實驗室在固定細胞的時候是用100%的 Methanol 加入五分鐘後吸乾並用PBS wash 兩次後再打洞 這樣可以讓細胞固定的很牢 可是如果我的細胞已經有transfection EGFP 或是DsRED 就不能用Methanol 因為會使EGFP不亮 我試過用2% formaldehyde 固定20分鐘 可是293T細胞感覺固定的並不是很好 常常wash幾次後細胞就...不見了 囧 即使在seeding細胞前先用FBS把dish或是cover slide 先coding過還是一樣 我也試過先用2% formaldehyde 固定20分鐘後 再用100%的 Methanol固定五分鐘 這樣細胞會牢 可是對EGFP的亮度依然有影響... 不知道板上的各位高手們有什麼好方法嗎? 可以讓細胞固定的牢又不會讓EGFP不亮... -- 流星，是不是因為承受了太多的孤單才會落下的 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　 如果是，那麼，請墜落吧 !　　　　　　　　　 ○ 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 <■︿ 因為我的孤單，好多..好多....　　　　　　 ......〉 ︵ 。 　　 --

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