※ 引述《cloudy1205 (事情好多)》之銘言： : 我本身沒有做過，實驗室也沒有這樣的技術， : 但是，seminar選了一篇跟protein trafficking有關的paper， : 想把方法學弄得更清楚，所以想請教點問題： : 1.paper上的方法學提到要將cell固定在"slide"上，請問"slide"是什麼？ : 是一種membrane，還是類似96孔盤，一個well固定一個cell，還是載玻片之類的 : 2.承接上題，如果是有孔的盤子，所有藥品都是一個well一個well加嗎？ : （用想像應該是這樣...想確定正確作法） : 3.固定cell用的1% paraformaldehyde treat 15min後，是要抽掉、倒掉， : 還是會乾掉？ : 目前能想到大概就這幾個問題，想請教有操作經驗的人，謝謝^^ 每個實驗室的作法可能都不一樣，我也不知道你看的paper裡面的細節是怎樣， 但我說一下我的好了，看能不能幫你了解。 假設用的是6-well tray... 1. 先在各個well放一片coverslip，就是蓋玻片。 2. 然後再把細胞放進well裡面讓它長，這樣細胞就會長在coverslip上。 3. 要fix cell 的時候，把培養液抽出來，用PBS洗一下細胞， 再把PBS抽掉，加入你的.... paraformaldehyde？ (我通常都是用-20C 100%MeOH，不確定paraformaldehyde是不是也是這樣做。) 這個步驟會把你的細胞固定在coverslip上。 固定完之後，把paraformaldehyde抽出來， 加入PBS在每個well裡面。 4. 再來你就可以用工具把固定有細胞的coverslip鏟起來， 看你要怎麼處理，例如stain with antibodies... 5. 處理完的上面固定有細胞的coverslip，就可以把他固定到slide上面， 然後放到scope下面觀察..... hope this help...... -- 　　夢想和現實是有距離的。 　　一切都將重新開始.... --

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