※ 引述《cloudy1205 (事情好多)》之铭言： : 我本身没有做过，实验室也没有这样的技术， : 但是，seminar选了一篇跟protein trafficking有关的paper， : 想把方法学弄得更清楚，所以想请教点问题： : 1.paper上的方法学提到要将cell固定在"slide"上，请问"slide"是什麽？ : 是一种membrane，还是类似96孔盘，一个well固定一个cell，还是载玻片之类的 : 2.承接上题，如果是有孔的盘子，所有药品都是一个well一个well加吗？ : （用想像应该是这样...想确定正确作法） : 3.固定cell用的1% paraformaldehyde treat 15min後，是要抽掉、倒掉， : 还是会乾掉？ : 目前能想到大概就这几个问题，想请教有操作经验的人，谢谢^^ 每个实验室的作法可能都不一样，我也不知道你看的paper里面的细节是怎样， 但我说一下我的好了，看能不能帮你了解。 假设用的是6-well tray... 1. 先在各个well放一片coverslip，就是盖玻片。 2. 然後再把细胞放进well里面让它长，这样细胞就会长在coverslip上。 3. 要fix cell 的时候，把培养液抽出来，用PBS洗一下细胞， 再把PBS抽掉，加入你的.... paraformaldehyde？ (我通常都是用-20C 100%MeOH，不确定paraformaldehyde是不是也是这样做。) 这个步骤会把你的细胞固定在coverslip上。 固定完之後，把paraformaldehyde抽出来， 加入PBS在每个well里面。 4. 再来你就可以用工具把固定有细胞的coverslip铲起来， 看你要怎麽处理，例如stain with antibodies... 5. 处理完的上面固定有细胞的coverslip，就可以把他固定到slide上面， 然後放到scope下面观察..... hope this help...... -- 　　梦想和现实是有距离的。 　　一切都将重新开始.... --

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