作者mojimoji
看板Biotech
標題[方法] 還有哪些方法可以避免pcr時發生突變？
時間Sat Oct 20 02:20:24 2007
如題
我能想到的只有 很pure的template(ration約1.9)
乾淨的水 低的cycle數(我用25個cycle)
hi-fidelity的enzyme(我用的是finnzyme的phusion搭配GC buffer)
4K多的產物還是有大約10個突變
還有哪些方法可以改進呢？ 謝謝！
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◆ From: 61.230.179.75
※ 編輯: mojimoji 來自: 61.230.179.75 (10/20 02:20)
1F：推 HCCY:你的反應相當不正常 error-prone pcr 也才 0.66%~1% 10/20 03:05
2F：→ HCCY:你用high-fidelity enzyme居然可以到 0.25%... 10/20 03:06
3F：→ HCCY:先去檢查你的buffer, MgCl2...有沒有問題吧 10/20 03:06
4F：推 HCCY:Mg2+過高 突變率會大幅增加 10/20 03:09
5F：推 Crow22312:dNTP mix 的量也會影響 PCR 的準確率 (只是影響比較小?) 10/20 06:01
6F：推 mojimoji:我也是覺得error-prone很高 可是原廠buf Mg濃度會不好?? 10/20 08:54
7F：推 HCCY:看看你是不是有搞錯濃度之類的 dNTP mix如果是unbalance 10/20 10:46
8F：→ HCCY:影響會比較大 10/20 10:47
9F：推 nixo:如果你的片段不是GC rich，建議用該kit附的HF buffer 10/20 10:57
10F：→ nixo:該kit的GC buffer錯誤率比HF buffer高 10/20 10:58
11F：推 MrCAKE:template的序列有確認過嗎 會不會原本就是錯的 10/20 14:26
12F：推 mojimoji:基本上樓上說得可能信我都有排除～ 還有什麼方法呢！ 10/22 22:44