作者mojimoji
看板Biotech
标题[方法] 还有哪些方法可以避免pcr时发生突变？
时间Sat Oct 20 02:20:24 2007
如题
我能想到的只有 很pure的template(ration约1.9)
乾净的水 低的cycle数(我用25个cycle)
hi-fidelity的enzyme(我用的是finnzyme的phusion搭配GC buffer)
4K多的产物还是有大约10个突变
还有哪些方法可以改进呢？ 谢谢！
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.230.179.75
※ 编辑: mojimoji 来自: 61.230.179.75 (10/20 02:20)
1F：推 HCCY:你的反应相当不正常 error-prone pcr 也才 0.66%~1% 10/20 03:05
2F：→ HCCY:你用high-fidelity enzyme居然可以到 0.25%... 10/20 03:06
3F：→ HCCY:先去检查你的buffer, MgCl2...有没有问题吧 10/20 03:06
4F：推 HCCY:Mg2+过高 突变率会大幅增加 10/20 03:09
5F：推 Crow22312:dNTP mix 的量也会影响 PCR 的准确率 (只是影响比较小?) 10/20 06:01
6F：推 mojimoji:我也是觉得error-prone很高 可是原厂buf Mg浓度会不好?? 10/20 08:54
7F：推 HCCY:看看你是不是有搞错浓度之类的 dNTP mix如果是unbalance 10/20 10:46
8F：→ HCCY:影响会比较大 10/20 10:47
9F：推 nixo:如果你的片段不是GC rich，建议用该kit附的HF buffer 10/20 10:57
10F：→ nixo:该kit的GC buffer错误率比HF buffer高 10/20 10:58
11F：推 MrCAKE:template的序列有确认过吗 会不会原本就是错的 10/20 14:26
12F：推 mojimoji:基本上楼上说得可能信我都有排除～ 还有什麽方法呢！ 10/22 22:44