作者kakaman (日子過的真快阿)
看板Biotech
標題[求救] 新手抽蛋白
時間Sun Oct 14 14:48:54 2007
我養的是血癌細胞 小小圓圓的
就算養滿一個T75 離下來的細胞看起來也很少 因為細胞小
前幾天加adriamycin處理細胞 總共用了三盤約六七分滿的T75
之前學長使用的劑量是5ug/ml 我總夠加了200ug/ml
昨天分別依七個時間點收蛋白 並拿去定量
發現蛋白濃度很低...
只有未加藥處理的蛋白濃度超高
加藥處理的就算用五倍sample buffer 每個well也要load將近40ul的sample...
想請問一下:
是因為我的細胞在加藥處理後死了一大片嗎?
還是RIPA buffer與PMSF的問題 我只加80ul去打破細胞(量不會很少)?
還有其他方面的問題導致我收的蛋白濃度很低嗎?
想請問一下大家 有這方面的經驗嗎?
謝謝~~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.92.78
1F：推 sunorange:我在加RIPA的時候都會看離心下的細胞量 決定要加多少 10/14 16:32
2F：→ sunorange:我有加到 50ul的時候 細胞打的破就好 10/14 16:33
3F：推 boblu:很顯然是加藥以後細胞死很大 不信 收細胞以前顯微鏡下看一看 10/14 18:39
4F：推 chvkimo:取一些些 染trypan blue看看 是否死的佔大多數 10/14 22:44
5F：推 blence:你用0.2mg/ml不只細胞會死,買來的adr也只夠你玩幾次實驗吧 10/15 00:17
6F：推 bb89233:不然就濃縮一下蛋白好了 10/15 00:23
7F：推 pizzicato:加到200有文獻依據嗎? 我之前看到paper只有加30ug/mL 10/17 13:14
8F：→ pizzicato:就可以篩出 K562/ADM 和一般 K562 (假設你用的是K562) 10/17 13:16
9F：推 tankcase:推樓上! 10/17 20:11