作者kakaman (日子过的真快阿)
看板Biotech
标题[求救] 新手抽蛋白
时间Sun Oct 14 14:48:54 2007
我养的是血癌细胞 小小圆圆的
就算养满一个T75 离下来的细胞看起来也很少 因为细胞小
前几天加adriamycin处理细胞 总共用了三盘约六七分满的T75
之前学长使用的剂量是5ug/ml 我总够加了200ug/ml
昨天分别依七个时间点收蛋白 并拿去定量
发现蛋白浓度很低...
只有未加药处理的蛋白浓度超高
加药处理的就算用五倍sample buffer 每个well也要load将近40ul的sample...
想请问一下:
是因为我的细胞在加药处理後死了一大片吗?
还是RIPA buffer与PMSF的问题 我只加80ul去打破细胞(量不会很少)?
还有其他方面的问题导致我收的蛋白浓度很低吗?
想请问一下大家 有这方面的经验吗?
谢谢~~
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◆ From: 163.25.92.78
1F：推 sunorange:我在加RIPA的时候都会看离心下的细胞量 决定要加多少 10/14 16:32
2F：→ sunorange:我有加到 50ul的时候 细胞打的破就好 10/14 16:33
3F：推 boblu:很显然是加药以後细胞死很大 不信 收细胞以前显微镜下看一看 10/14 18:39
4F：推 chvkimo:取一些些 染trypan blue看看 是否死的占大多数 10/14 22:44
5F：推 blence:你用0.2mg/ml不只细胞会死,买来的adr也只够你玩几次实验吧 10/15 00:17
6F：推 bb89233:不然就浓缩一下蛋白好了 10/15 00:23
7F：推 pizzicato:加到200有文献依据吗? 我之前看到paper只有加30ug/mL 10/17 13:14
8F：→ pizzicato:就可以筛出 K562/ADM 和一般 K562 (假设你用的是K562) 10/17 13:16
9F：推 tankcase:推楼上! 10/17 20:11