快速翻譯法 ※ 引述《Mu6v2 (1/2倒數)》之銘言： : 沒學過轉染 問過有跟實驗的朋友 : 說是細胞送進DNA 確定它的量 加入螢光物 然後上機測定 : 但在翻譯上還是很不順 有些句子也不知道要怎麼接= =" : 請看的懂得人指示一下 : 瞬時轉染和雙螢光素?分析 (打不出來一直出現問號= =) : Transient transfections and dual luciferase reporter assays : T47D cells were subcultured with 0.5x10 5/well cells in 24-well plates 1 day : before transfection. : T47D乳癌細胞株轉染前先次培養在24well的plate1天,每個well要有0.5x10 5? 在24well的plate上 每個well養0.5乘以十的五次方數目的細胞 一天後進行transfection : Fugene 6 was used to transfect T47D cells with both : 0.19 mg/well of a plasmid containing Firefly-LUC under the regulation of : three copies of HRE from the PGK-1 gene (OB-HRE) and a minimal : Simian virus 40 (SV40) promoter and 0.01 mg/well of pRL SV40 (which : contains an SV40-driven Renilla LUC construct) as an internal control to : normalise the Firefly-LUC expression according to the manufacturer’s : instructions. : 根據廠商的指示3個HRE的複製品:PGK-1 gene,最小的SV40啟動子和0.01mg/well的pRL SV4 : 當作實驗室內部control去 ????? Firefly-LUC的表現 : 以fugene6轉染T47D乳癌株細胞,plasmid嵌入Firefly-LUC 利用fugene產品來進行transfection transfection的直體是 1. 含有3個PGK-1基因的HRE的序列+minimal SV40啟動子 接在firefly-luciferase(螢火蟲的冷光酵素基因)基因前面 0.19 mg/well 2. pRL SV40:當作 內部控制組用 質體 這是水母來的冷光酵素基因 0.01 mg/well : Following 12 h transfection and 24 h serum starvation, cells : were either incubated in the presence or absence of bFGF (10 ng/mL) for 6, : 18, or 24 h under normoxic or hypoxic conditions, respectively, or : pretreated with PD98059 (20 mM) or LY294002 (20 mM) for 20min before : exposure to hypoxia in the presence or absence of bFGF (10 ng/mL) for : 18 h. : 接著12小時的轉染和24小時的serum starvation,在有氧或缺氧的情況下細胞培養存在或缺乏bFGF 6,18,24小時 : 在暴露在缺氧再存在或缺乏bFGF前以PD98059或LY294002前處理20分 : 如果不能PO在這的話我會刪掉 謝謝..... 在12小時的transfection後 移除培養基中的血清 細胞添加或是不添加 bFGF 在無氧或是有氧條件下 或是 添加阻礙劑 PD98059 (20 mM) or LY294002 (20 mM)於以上特定條件 沒有按照句子翻 不過應該可以知道他在幹嘛吧? 剩下自己翻囉 原理不懂的話 你要參考 promega的說明書也可以.. -- ▏▄ BioTech 板 / 一個 Bio 研究討論板 ▏▄ ▄ ▄ 分類看板 telnet://ptt.cc ▏▂ ▂ ▂ ▁ 國家研究院 政治,文學,學術 ▏─ ▂ ▁ 科學學術研究院 ▏─ ★BIOTECH PTT統合生命科學研究院 ▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂ ________________________________ HiBaby --

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