快速翻译法 ※ 引述《Mu6v2 (1/2倒数)》之铭言： : 没学过转染 问过有跟实验的朋友 : 说是细胞送进DNA 确定它的量 加入萤光物 然後上机测定 : 但在翻译上还是很不顺 有些句子也不知道要怎麽接= =" : 请看的懂得人指示一下 : 瞬时转染和双萤光素?分析 (打不出来一直出现问号= =) : Transient transfections and dual luciferase reporter assays : T47D cells were subcultured with 0.5x10 5/well cells in 24-well plates 1 day : before transfection. : T47D乳癌细胞株转染前先次培养在24well的plate1天,每个well要有0.5x10 5? 在24well的plate上 每个well养0.5乘以十的五次方数目的细胞 一天後进行transfection : Fugene 6 was used to transfect T47D cells with both : 0.19 mg/well of a plasmid containing Firefly-LUC under the regulation of : three copies of HRE from the PGK-1 gene (OB-HRE) and a minimal : Simian virus 40 (SV40) promoter and 0.01 mg/well of pRL SV40 (which : contains an SV40-driven Renilla LUC construct) as an internal control to : normalise the Firefly-LUC expression according to the manufacturer’s : instructions. : 根据厂商的指示3个HRE的复制品:PGK-1 gene,最小的SV40启动子和0.01mg/well的pRL SV4 : 当作实验室内部control去 ????? Firefly-LUC的表现 : 以fugene6转染T47D乳癌株细胞,plasmid嵌入Firefly-LUC 利用fugene产品来进行transfection transfection的直体是 1. 含有3个PGK-1基因的HRE的序列+minimal SV40启动子 接在firefly-luciferase(萤火虫的冷光酵素基因)基因前面 0.19 mg/well 2. pRL SV40:当作 内部控制组用 质体 这是水母来的冷光酵素基因 0.01 mg/well : Following 12 h transfection and 24 h serum starvation, cells : were either incubated in the presence or absence of bFGF (10 ng/mL) for 6, : 18, or 24 h under normoxic or hypoxic conditions, respectively, or : pretreated with PD98059 (20 mM) or LY294002 (20 mM) for 20min before : exposure to hypoxia in the presence or absence of bFGF (10 ng/mL) for : 18 h. : 接着12小时的转染和24小时的serum starvation,在有氧或缺氧的情况下细胞培养存在或缺乏bFGF 6,18,24小时 : 在暴露在缺氧再存在或缺乏bFGF前以PD98059或LY294002前处理20分 : 如果不能PO在这的话我会删掉 谢谢..... 在12小时的transfection後 移除培养基中的血清 细胞添加或是不添加 bFGF 在无氧或是有氧条件下 或是 添加阻碍剂 PD98059 (20 mM) or LY294002 (20 mM)於以上特定条件 没有按照句子翻 不过应该可以知道他在干嘛吧? 剩下自己翻罗 原理不懂的话 你要参考 promega的说明书也可以.. -- ▏▄ BioTech 板 / 一个 Bio 研究讨论板 ▏▄ ▄ ▄ 分类看板 telnet://ptt.cc ▏▂ ▂ ▂ ▁ 国家研究院 政治,文学,学术 ▏─ ▂ ▁ 科学学术研究院 ▏─ ★BIOTECH PTT统合生命科学研究院 ▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂ ________________________________ HiBaby --

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