作者driws (自由 呼吸 存在)
看板Biotech
標題[問題] 向中研院購買的shRNA
時間Tue Oct 2 12:18:19 2007
抽向中研院購買的shRNA的plasmid是否有特殊的技巧?
我用Quiegen的mini prep kit抽了好幾次
養小量抽3 c.c菌液最後用30 uL的水去elute
但幾乎出抽不出來...濃度低到只有0.05~0.06 ug/ul
過程十分小心
260/280的比值竟然高到3甚至4
以前抽plasmid從來沒有過這樣的問題
請問有經驗的前輩該如何改進 謝謝回答
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.60.163
1F：推 mandible:寫信去RNAi cortism問! 10/02 13:29
2F：推 ymme:你是用TB養嗎 10/02 13:45
3F：推 hal:這個shRNA的菌好像都長的特別慢就連塗plate時也是長超小 10/02 14:00
4F：→ hal:所以養的時間比較久才會抽的比較多 我用LB 5ml 養20小時吧 10/02 14:03
5F：推 driws:我是用LB養 我塗plate的時候長的很小顆但是很多 塗太多嗎? 10/02 15:15
6F：→ driws:所以養小量要抽到5 c.c 才會有正常的濃度囉... 10/02 15:17
7F：推 ruthwu:要用TB以300rpm養17-19小時,建議值是3倍稀釋OD600=0.4-0.6 10/02 18:29
8F：→ ruthwu:我是抽5ml,回溶20ul 10/02 18:32
9F：推 milkpa:如果是low copy的plasmid就會較少量，長度較長可加熱再elut 10/02 22:34