作者driws (自由 呼吸 存在)
看板Biotech
标题[问题] 向中研院购买的shRNA
时间Tue Oct 2 12:18:19 2007
抽向中研院购买的shRNA的plasmid是否有特殊的技巧?
我用Quiegen的mini prep kit抽了好几次
养小量抽3 c.c菌液最後用30 uL的水去elute
但几乎出抽不出来...浓度低到只有0.05~0.06 ug/ul
过程十分小心
260/280的比值竟然高到3甚至4
以前抽plasmid从来没有过这样的问题
请问有经验的前辈该如何改进 谢谢回答
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.60.163
1F：推 mandible:写信去RNAi cortism问! 10/02 13:29
2F：推 ymme:你是用TB养吗 10/02 13:45
3F：推 hal:这个shRNA的菌好像都长的特别慢就连涂plate时也是长超小 10/02 14:00
4F：→ hal:所以养的时间比较久才会抽的比较多 我用LB 5ml 养20小时吧 10/02 14:03
5F：推 driws:我是用LB养 我涂plate的时候长的很小颗但是很多 涂太多吗? 10/02 15:15
6F：→ driws:所以养小量要抽到5 c.c 才会有正常的浓度罗... 10/02 15:17
7F：推 ruthwu:要用TB以300rpm养17-19小时,建议值是3倍稀释OD600=0.4-0.6 10/02 18:29
8F：→ ruthwu:我是抽5ml,回溶20ul 10/02 18:32
9F：推 milkpa:如果是low copy的plasmid就会较少量，长度较长可加热再elut 10/02 22:34