作者bicon (不以物喜不以己悲)
看板Biotech
標題[問題] Huh7 cell line 收細胞 細胞易破
時間Sun Sep 16 01:53:50 2007
用CaCl2 對Huh7 做transfection
用12 well plate, 細胞數 1x10*5 /well
從第一天seeding後到第四天收細胞
收細胞用的是trypsin，遇到的問題是--> passage不下來，(懷疑是到第四天細胞太滿了)
因此trypsin作用的時間就讓他久一點
但是放的時間太久細胞又會破掉(最多放到7分鐘 37度c還不下來)，
細胞破了，實驗就白費了
請問大家有這問題嗎?
怎麻解決呢?
之前用293A 不會有這問題
謝謝大家
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im a good student
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 59.115.83.27
1F：推 poki806:先用含有5mM EDTA的PBS wash 2-3次 每次靜置2分鐘 09/16 22:17
2F：推 stemcell:用PBS wash過後 直接加lysis buffer到well 09/17 09:39