作者bicon (不以物喜不以己悲)
看板Biotech
标题[问题] Huh7 cell line 收细胞 细胞易破
时间Sun Sep 16 01:53:50 2007
用CaCl2 对Huh7 做transfection
用12 well plate, 细胞数 1x10*5 /well
从第一天seeding後到第四天收细胞
收细胞用的是trypsin，遇到的问题是--> passage不下来，(怀疑是到第四天细胞太满了)
因此trypsin作用的时间就让他久一点
但是放的时间太久细胞又会破掉(最多放到7分钟 37度c还不下来)，
细胞破了，实验就白费了
请问大家有这问题吗?
怎麻解决呢?
之前用293A 不会有这问题
谢谢大家
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im a good student
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 59.115.83.27
1F：推 poki806:先用含有5mM EDTA的PBS wash 2-3次 每次静置2分钟 09/16 22:17
2F：推 stemcell:用PBS wash过後 直接加lysis buffer到well 09/17 09:39