作者mournermind (阿矇)
看板Biotech
標題[問題] 想問大家induction時所選擇的OD600值
時間Thu Sep 13 22:10:56 2007
我們實驗室長久以來的方法大概就是
1. single colony -> 養12hr以上 OD600約1.XX
2. 以約1/10的菌液加入新鮮LB中 OD600約0.1 進行refresh
3. 約2~3hr後 OD600 約0.5進行IPTG induce
4. 取定點時間induced的菌看蛋白表現
可是我在pET mannual中所看到的方法大概是
1. single colony -> 養到 OD600約 0.5
2. 以3ml的菌液加入100ml新鮮LB中進行refresh
3. 約2~3hr後 OD600 約0.5 ~ 1 進行IPTG induce
4. 取定點時間induced的菌看蛋白表現
以上我沒誤解應該是這樣
另外
我問其他家專門做蛋白的同學他跟我說
她們家老闆跟她們說菌液refresh後大概OD600要到0.8
(反正就是快進入station phase)
時讓菌達到快最大量時再進行IPTG induce會得到較多的產物
我現在有點迷糊掉了 不知道板上的其他學長姐所表現蛋白的條件會是怎樣??
另外因為我現在表現的蛋白是大部份不可溶但supernatent也表現出有產物的情況
(SDS PAGE就可看出 不是很濃但比其他雜band強3倍以上)
我現在已經進行25度C的養菌 可是養了22hr了LB還是很澄清ˊˋ 這樣正常嗎
(我的菌 lacI represser很像鎖不太緊即使不加IPTG也會表現
我在37度C養的這隻要表現的菌也會比一般的菌長的慢點)
另外在進行低溫誘導時是否也是要在菌OD600到一定值後才加IPTG?
還是一開始就可以加了??(不好意思問這種問題 因為實驗室學長姐要我自己
try try看ˊˋ 可是我想問有經驗的比較快... ...)
以上謝謝各位學長姐啦~
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1F：推 alaric:每個蛋白的表達, 要自己抓個最適條件... 09/14 18:35
2F：推 bluecsky:這真的是case by case..別人給的條件不一定適合.. 09/16 01:18
3F：→ bluecsky:最好還是自己多試試各種條件..然後去跑跑SDS-PAGE 09/16 01:18
4F：→ bluecsky:跑total protein就可以..再跟老闆討論.. 09/16 01:19
5F：→ bluecsky:因為你需要的用途我不了解...有時候雖然未達到最好的條件 09/16 01:19
6F：→ bluecsky:但是能達要需要用量的條件其實就能接受.. 09/16 01:20