作者mournermind (阿蒙)
看板Biotech
标题[问题] 想问大家induction时所选择的OD600值
时间Thu Sep 13 22:10:56 2007
我们实验室长久以来的方法大概就是
1. single colony -> 养12hr以上 OD600约1.XX
2. 以约1/10的菌液加入新鲜LB中 OD600约0.1 进行refresh
3. 约2~3hr後 OD600 约0.5进行IPTG induce
4. 取定点时间induced的菌看蛋白表现
可是我在pET mannual中所看到的方法大概是
1. single colony -> 养到 OD600约 0.5
2. 以3ml的菌液加入100ml新鲜LB中进行refresh
3. 约2~3hr後 OD600 约0.5 ~ 1 进行IPTG induce
4. 取定点时间induced的菌看蛋白表现
以上我没误解应该是这样
另外
我问其他家专门做蛋白的同学他跟我说
她们家老板跟她们说菌液refresh後大概OD600要到0.8
(反正就是快进入station phase)
时让菌达到快最大量时再进行IPTG induce会得到较多的产物
我现在有点迷糊掉了 不知道板上的其他学长姐所表现蛋白的条件会是怎样??
另外因为我现在表现的蛋白是大部份不可溶但supernatent也表现出有产物的情况
(SDS PAGE就可看出 不是很浓但比其他杂band强3倍以上)
我现在已经进行25度C的养菌 可是养了22hr了LB还是很澄清ˊˋ 这样正常吗
(我的菌 lacI represser很像锁不太紧即使不加IPTG也会表现
我在37度C养的这只要表现的菌也会比一般的菌长的慢点)
另外在进行低温诱导时是否也是要在菌OD600到一定值後才加IPTG?
还是一开始就可以加了??(不好意思问这种问题 因为实验室学长姐要我自己
try try看ˊˋ 可是我想问有经验的比较快... ...)
以上谢谢各位学长姐啦~
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◆ From: 140.113.173.246
1F：推 alaric:每个蛋白的表达, 要自己抓个最适条件... 09/14 18:35
2F：推 bluecsky:这真的是case by case..别人给的条件不一定适合.. 09/16 01:18
3F：→ bluecsky:最好还是自己多试试各种条件..然後去跑跑SDS-PAGE 09/16 01:18
4F：→ bluecsky:跑total protein就可以..再跟老板讨论.. 09/16 01:19
5F：→ bluecsky:因为你需要的用途我不了解...有时候虽然未达到最好的条件 09/16 01:19
6F：→ bluecsky:但是能达要需要用量的条件其实就能接受.. 09/16 01:20