作者kvw (Je t'aime)
看板Biotech
標題Re: [問題] 請問一下cloning的問題
時間Mon Sep 3 22:01:34 2007
※ 引述《kvw (Je t'aime)》之銘言：
: 標題: [問題] 請問一下cloning的問題
: 時間: Mon Sep 3 14:42:10 2007
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: 最近從LB agar上挑白色單一菌落
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: 到LB broth(含AMP) overnight培養
:
: 但是很難將菌液搖到混濁耶
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: 似乎都是不長
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: 也確認過所挑的應該不是衛星菌落
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: 因為養16~18 hrs就挑了 看型態也不像是衛星菌落
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: 有人有遇到這樣的情形嗎?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
: ◆ From: 192.192.90.211
: 推 KittyGod:會不會是雜菌啊?污染的雜菌長出來可能也是白色的 09/03 16:49
: 推 kvw:可是可以在含AMP的LB agar上長的機會也不大吧 09/03 18:16
: 推 intotheman:十之八九是盤失效了 你看看那些菌落是不是大小顆 09/03 19:45
: → intotheman:基本上有沾到菌就養得起來 雜菌通常不是沒長就是長不好 09/03 19:46
: 推 mojimoji:跟我今天碰到的問題一樣 xd.. 09/03 20:15
: 推 enisx:你用在LB/amp plate上的Amp失效了! 所以挑的是雜菌 09/03 20:56
: → enisx:簡單判斷的方法是:與你當初的competent cell的 colony比較 09/03 20:57
: → enisx:長的不一樣,或是較小,或是有許多衛星細胞的話,那就是Amp die 09/03 20:58
: 推 kvw:那我之前所挑的菌有些會長 有些不長 也是因為這個原因囉? 09/03 21:48
謝謝大家的解答
再問一下 所以我之前實驗挑的white colony 有些長 有些不長
(接種在不同批配置的LB agar)
也是因為AMP失效的關係嗎? 那次的菌落不是很多
有沒有可能AMP效能減低 但卻沒有完全失效
所以還是有雜菌 但卻不是那麼多
因為的確這次的白色菌落實在太小了 而且數目有點多
讓我感覺不是那麼踏實 應該是真的AMP失效了
害老闆還以為transformation的效率大幅提升 Orz
還有一個問題 就是LB agar溫度太高是讓AMP失效的原因嗎?
因為autoclave完後 水浴一下就加進去了
但是剩下的AMP加在LB broth中卻是可以抑菌的
所以真的要確實降到50度再加進去嗎? 還是大概就可以了?
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◆ From: 192.192.90.211
1F：推 intotheman:如果同一盤挑菌 友沒長或長不好的情況 那很可能整盤 09/03 22:09
2F：→ intotheman:都不能用了 你可以在抽plasmid第一步離心時看菌的顏色 09/03 22:09
3F：→ intotheman:正常是白色帶點黃 如果看到其他顏色或者在加buffer-II 09/03 22:10
4F：→ intotheman:看到沒牽絲狀 那你可以放棄了 裡面沒plasmid 09/03 22:11
5F：→ intotheman:我在教學弟妹時都會很care他們加抗生素的溫度 09/03 22:12
6F：→ intotheman:原則上是放在手背不覺得燙手即可 通常裡面會加磁石 09/03 22:13
7F：→ intotheman:方便攪拌 一個plate好壞 影響的會是全部人阿 09/03 22:14
8F：推 kvw:感謝大大的回答 謝謝! 09/03 22:33
9F：推 elgase:推第七行!! 09/04 11:51