作者kvw (Je t'aime)
看板Biotech
标题Re: [问题] 请问一下cloning的问题
时间Mon Sep 3 22:01:34 2007
※ 引述《kvw (Je t'aime)》之铭言：
: 标题: [问题] 请问一下cloning的问题
: 时间: Mon Sep 3 14:42:10 2007
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: 最近从LB agar上挑白色单一菌落
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: 到LB broth(含AMP) overnight培养
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: 但是很难将菌液摇到混浊耶
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: 似乎都是不长
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: 也确认过所挑的应该不是卫星菌落
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: 因为养16~18 hrs就挑了 看型态也不像是卫星菌落
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: 有人有遇到这样的情形吗?
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: ◆ From: 192.192.90.211
: 推 KittyGod:会不会是杂菌啊?污染的杂菌长出来可能也是白色的 09/03 16:49
: 推 kvw:可是可以在含AMP的LB agar上长的机会也不大吧 09/03 18:16
: 推 intotheman:十之八九是盘失效了 你看看那些菌落是不是大小颗 09/03 19:45
: → intotheman:基本上有沾到菌就养得起来 杂菌通常不是没长就是长不好 09/03 19:46
: 推 mojimoji:跟我今天碰到的问题一样 xd.. 09/03 20:15
: 推 enisx:你用在LB/amp plate上的Amp失效了! 所以挑的是杂菌 09/03 20:56
: → enisx:简单判断的方法是:与你当初的competent cell的 colony比较 09/03 20:57
: → enisx:长的不一样,或是较小,或是有许多卫星细胞的话,那就是Amp die 09/03 20:58
: 推 kvw:那我之前所挑的菌有些会长 有些不长 也是因为这个原因罗? 09/03 21:48
谢谢大家的解答
再问一下 所以我之前实验挑的white colony 有些长 有些不长
(接种在不同批配置的LB agar)
也是因为AMP失效的关系吗? 那次的菌落不是很多
有没有可能AMP效能减低 但却没有完全失效
所以还是有杂菌 但却不是那麽多
因为的确这次的白色菌落实在太小了 而且数目有点多
让我感觉不是那麽踏实 应该是真的AMP失效了
害老板还以为transformation的效率大幅提升 Orz
还有一个问题 就是LB agar温度太高是让AMP失效的原因吗?
因为autoclave完後 水浴一下就加进去了
但是剩下的AMP加在LB broth中却是可以抑菌的
所以真的要确实降到50度再加进去吗? 还是大概就可以了?
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◆ From: 192.192.90.211
1F：推 intotheman:如果同一盘挑菌 友没长或长不好的情况 那很可能整盘 09/03 22:09
2F：→ intotheman:都不能用了 你可以在抽plasmid第一步离心时看菌的颜色 09/03 22:09
3F：→ intotheman:正常是白色带点黄 如果看到其他颜色或者在加buffer-II 09/03 22:10
4F：→ intotheman:看到没牵丝状 那你可以放弃了 里面没plasmid 09/03 22:11
5F：→ intotheman:我在教学弟妹时都会很care他们加抗生素的温度 09/03 22:12
6F：→ intotheman:原则上是放在手背不觉得烫手即可 通常里面会加磁石 09/03 22:13
7F：→ intotheman:方便搅拌 一个plate好坏 影响的会是全部人阿 09/03 22:14
8F：推 kvw:感谢大大的回答 谢谢! 09/03 22:33
9F：推 elgase:推第七行!! 09/04 11:51