作者littlebu (LittleBU)
看板Biotech
標題[問題] 請問自製Gradient SDS PAGE的可行性與方法？
時間Mon Sep 3 12:37:19 2007
各位先進
看paper的時候會看到別人使用NuPAGE的4-12% PAGE
想請問如果我也有類似的需求
那該如何自製類似的gel?
假如我想要的梯度是15%-8%
那我應該等15%的Gel凝了之後再加8%下去凝？
還是15%和8%各加完APS、TEMED後混在一起下去凝？
另外還有一個問題
如果loading兩種protein marker
結果marker1和marker2同樣分子量的band
出現在不同高度上 這樣是要相信誰 囧...
先謝謝各位的指教了
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.175.107
2F：推 littlebu:謝謝您，可是沒有＄＄，才會想要問有沒有別的方法 09/03 14:20
3F：推 stemcell:一定要用蠕動pump吧....手工能作gradient 算是達人了 09/03 15:11
4F：推 littlebu:那請問可以做兩種％的嗎？ 謝謝 09/03 15:41
5F：推 stemcell:你要不要先說你的目的..也沒有不行做兩種％ 只是很少見 09/03 16:38
6F：推 littlebu:再次謝謝您的回應 我要的目標在21kda和160kda 09/03 18:11
7F：→ littlebu:但是用11%的gel 130和170的marker相隔很近 09/03 18:12
8F：→ littlebu:所以想請問是否能用不同濃度來分比較開一點 Orz 09/03 18:13
9F：推 missoul:作過 用針筒加針頭穩定流進去 有效果 09/03 19:30
10F：→ missoul:而且做法是 在微量離心管上配好各種梯度濃度 先放流濃液 09/03 19:31
11F：→ missoul:配法是做比例式地混合兩濃度的膠液 09/03 19:32
12F：推 KittyGod:針筒可行+1 09/03 21:48
13F：推 littlebu:請問您 例如8～15％ 是將兩種濃度都配好 APS也加完 09/04 01:21
14F：→ littlebu:之後再將兩種濃度以不同比例配在微量離心管？ 09/04 01:22
15F：→ littlebu:然後用針筒將每一小管依次緩慢注入玻璃內嗎？ 09/04 01:22
16F：推 littlebu:還有這樣的話每一個比例大約要加多少量呢？謝謝 09/04 01:26