作者mojimoji (Tim)
看板Biotech
標題[方法] 如何對plasmid做site-directed mutation ?
時間Sun Sep 2 10:09:31 2007
我CLONE了一個gene進去plasmid中
不過因為是pcr product所以難免有mutation
請問要如何利用點突變的方法把他改回來呢
有沒有可以參考的文章 謝謝!
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◆ From: 61.230.180.142
1F：推 sisyphus:先做SEQUENCE確定有問題再來擔心吧~~ 09/02 10:16
2F：推 Highwind:本末到置了吧,另外single clone哪來的mutation問題 09/02 10:16
3F：推 mojimoji:就是做了sequencing發現有mutation啊！因為orf很長 所以 09/02 12:59
4F：推 mojimoji:不想重新PCR重接 想直接拿有mutation的plasmid當template 09/02 13:01
5F：→ mojimoji:PCR短片段接回去 09/02 13:01
6F：→ aggaci:有多挑幾顆定序嘛？ 09/02 13:56
7F：推 intotheman:用一般的Quickchange方法 設計primer 用pfu去PCR 09/02 14:23
8F：→ intotheman:如果mutation太多 你還是重新check你來源的gene是不是 09/02 14:23
9F：→ intotheman:問題,or 事RT-PCR過來的? 有時後多做幾個點突變 不會 09/02 14:24
10F：→ intotheman:比再接一次clone輕鬆 09/02 14:25
11F：推 sisyphus:如果長到難免會出現mutation的長度..mutation完出現新的 09/02 15:47
12F：→ sisyphus:你們準備怎麼辦? 09/02 15:48
13F：→ sisyphus:不如多挑幾個去sequencing 找到對為止 09/02 15:48