作者mojimoji (Tim)
看板Biotech
标题[方法] 如何对plasmid做site-directed mutation ?
时间Sun Sep 2 10:09:31 2007
我CLONE了一个gene进去plasmid中
不过因为是pcr product所以难免有mutation
请问要如何利用点突变的方法把他改回来呢
有没有可以参考的文章 谢谢!
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◆ From: 61.230.180.142
1F：推 sisyphus:先做SEQUENCE确定有问题再来担心吧~~ 09/02 10:16
2F：推 Highwind:本末到置了吧,另外single clone哪来的mutation问题 09/02 10:16
3F：推 mojimoji:就是做了sequencing发现有mutation啊！因为orf很长 所以 09/02 12:59
4F：推 mojimoji:不想重新PCR重接 想直接拿有mutation的plasmid当template 09/02 13:01
5F：→ mojimoji:PCR短片段接回去 09/02 13:01
6F：→ aggaci:有多挑几颗定序嘛？ 09/02 13:56
7F：推 intotheman:用一般的Quickchange方法 设计primer 用pfu去PCR 09/02 14:23
8F：→ intotheman:如果mutation太多 你还是重新check你来源的gene是不是 09/02 14:23
9F：→ intotheman:问题,or 事RT-PCR过来的? 有时後多做几个点突变 不会 09/02 14:24
10F：→ intotheman:比再接一次clone轻松 09/02 14:25
11F：推 sisyphus:如果长到难免会出现mutation的长度..mutation完出现新的 09/02 15:47
12F：→ sisyphus:你们准备怎麽办? 09/02 15:48
13F：→ sisyphus:不如多挑几个去sequencing 找到对为止 09/02 15:48