作者fosca (沒故事聽 NNNN)
看板Biotech
標題Re: [問題] 如何去除使用urea去作蛋白的deaggregation
時間Wed Aug 29 20:10:14 2007
※ 引述《ronall (暱稱小公主的!扣十分先)》之銘言：
: 餓死抬頭
: 想請教眾高手們
: 小弟使用E.coli生產突變用蛋白
: 突變蛋白上接了一段CBP-Taq
: 純化後去鹽濃縮並以水回溶 ==>盡量不要用水回溶，蛋白質溶解需要鹽分喔
: 但總是會有些沉澱
: 我認為那是蛋白的aggregation
蛋白質會aggregation可能是有些疏水性的區域暴露在蛋白質表面，
可能是(1)E.coli表現蛋白時，沒有摺疊100%正確。
先建議在利用E.coli表現蛋白時降低溫度，轉速，inducer含量。
也可能是(2)你的蛋白本身表面就含比較多疏水性的區域，有很多binding site等等
建議你可以在純化過程中加入ㄧ些清潔劑;如Triton X-100，它會吸附在疏水性區域，
使蛋白質溶解度上升。當然加入清潔劑前提是它不會影響你的後續實驗，而清潔劑加入
的最大比例你可以問問辜狗大神。另外也可以加入Glycerol，PEG等等藥劑；
看過最扯的是這篇A Simple Method for Improving Protein Solubility and
Long-Term Stability J. AM. CHEM. SOC. 2004, 126, 8933-8939 9 8933。
那篇作者說加入L-Arg and L-Glu at 50 mM可以提高8.7倍蛋白溶解度。哈哈，
你可以試看看再來和版友們說好不好用。
其實超多藥劑可以試看看，問辜狗大神就OK拉。
最後建議不要試refolding，那真是噩夢。
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.132.101
1F：推 Ren:so this paper doesn't work? (I never tried) 08/29 23:13
2F：→ rivis:我的看法推到前一篇去了，請你回去參考一下 08/30 18:23