作者fosca (没故事听 NNNN)
看板Biotech
标题Re: [问题] 如何去除使用urea去作蛋白的deaggregation
时间Wed Aug 29 20:10:14 2007
※ 引述《ronall (昵称小公主的!扣十分先)》之铭言：
: 饿死抬头
: 想请教众高手们
: 小弟使用E.coli生产突变用蛋白
: 突变蛋白上接了一段CBP-Taq
: 纯化後去盐浓缩并以水回溶 ==>尽量不要用水回溶，蛋白质溶解需要盐分喔
: 但总是会有些沉淀
: 我认为那是蛋白的aggregation
蛋白质会aggregation可能是有些疏水性的区域暴露在蛋白质表面，
可能是(1)E.coli表现蛋白时，没有摺叠100%正确。
先建议在利用E.coli表现蛋白时降低温度，转速，inducer含量。
也可能是(2)你的蛋白本身表面就含比较多疏水性的区域，有很多binding site等等
建议你可以在纯化过程中加入ㄧ些清洁剂;如Triton X-100，它会吸附在疏水性区域，
使蛋白质溶解度上升。当然加入清洁剂前提是它不会影响你的後续实验，而清洁剂加入
的最大比例你可以问问辜狗大神。另外也可以加入Glycerol，PEG等等药剂；
看过最扯的是这篇A Simple Method for Improving Protein Solubility and
Long-Term Stability J. AM. CHEM. SOC. 2004, 126, 8933-8939 9 8933。
那篇作者说加入L-Arg and L-Glu at 50 mM可以提高8.7倍蛋白溶解度。哈哈，
你可以试看看再来和版友们说好不好用。
其实超多药剂可以试看看，问辜狗大神就OK拉。
最後建议不要试refolding，那真是噩梦。
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.132.101
1F：推 Ren:so this paper doesn't work? (I never tried) 08/29 23:13
2F：→ rivis:我的看法推到前一篇去了，请你回去参考一下 08/30 18:23