抱歉 小弟又來請教各位了 小弟純化蛋白後 發現蛋白有aggregation的現象 我擔心這會影響我的蛋白產率 所以想使用Urea去deaggregation 之後想使用透析的方式除去Urea 我想問的是 refolding回來且為正確結構的蛋白能有多少? 因為我有問過我家的博士後 他跟我說別將urea處理後的蛋白混在正常結構的蛋白中 他認為refolding的結構不確定正確與否 必須經由CD去鑑定 不知各位有什麼樣的想法呢? ==========================細節說明討論發起線================================== 先感謝各位大大的回應 包含前面用水球丟了我好幾次的大大 我想就我的想法說明好了 確實 當"產量"夠的時候 (產量定義為足夠我進行實驗的用量) 我確實是不需在乎aggregation的部分 但是當我產量不夠的時候 我必須額外再生產一批 (不含等待的純工作天約14天) 因此小弟在評估從沉澱中將aggregation作denature並使其refolding 這樣的方式在時間上以及程序上是否比較有利? 然 我的實驗室並沒有人做過這樣的實驗 我想問的是 博士後認為我必須將urea處理的沉澱 與上清液的正常蛋白分開處理 因為他覺得refolding miss的機會很大 所以認為我必須分開處理後再以CD或其他方式去鑑定結構 但我認為 我知道refolding miss的機會存在 但也不能否定正常foding蛋白的存在 同時 我實驗用的蛋白其Apo-,Holo-兩種構型僅有些許不同 PI值分別為3.2, 3.3 PI值差距這麼小的情況下能夠以Q-sepharose分離 那麼 folding miss的蛋白我認為應該也能夠被分離 既然能被分離 那為何我還必須獨立處理這個部分呢? 這個部分是我最想知道的 感謝各位囉^_^ --

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