抱歉 小弟又来请教各位了 小弟纯化蛋白後 发现蛋白有aggregation的现象 我担心这会影响我的蛋白产率 所以想使用Urea去deaggregation 之後想使用透析的方式除去Urea 我想问的是 refolding回来且为正确结构的蛋白能有多少? 因为我有问过我家的博士後 他跟我说别将urea处理後的蛋白混在正常结构的蛋白中 他认为refolding的结构不确定正确与否 必须经由CD去监定 不知各位有什麽样的想法呢? ==========================细节说明讨论发起线================================== 先感谢各位大大的回应 包含前面用水球丢了我好几次的大大 我想就我的想法说明好了 确实 当"产量"够的时候 (产量定义为足够我进行实验的用量) 我确实是不需在乎aggregation的部分 但是当我产量不够的时候 我必须额外再生产一批 (不含等待的纯工作天约14天) 因此小弟在评估从沉淀中将aggregation作denature并使其refolding 这样的方式在时间上以及程序上是否比较有利? 然 我的实验室并没有人做过这样的实验 我想问的是 博士後认为我必须将urea处理的沉淀 与上清液的正常蛋白分开处理 因为他觉得refolding miss的机会很大 所以认为我必须分开处理後再以CD或其他方式去监定结构 但我认为 我知道refolding miss的机会存在 但也不能否定正常foding蛋白的存在 同时 我实验用的蛋白其Apo-,Holo-两种构型仅有些许不同 PI值分别为3.2, 3.3 PI值差距这麽小的情况下能够以Q-sepharose分离 那麽 folding miss的蛋白我认为应该也能够被分离 既然能被分离 那为何我还必须独立处理这个部分呢? 这个部分是我最想知道的 感谢各位罗^_^ --

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