作者ronall (暱稱小公主的!扣十分先)
看板Biotech
標題[問題] 如何去除使用urea去作蛋白的deaggregation
時間Tue Aug 28 12:00:39 2007
餓死抬頭
想請教眾高手們
小弟使用E.coli生產突變用蛋白
突變蛋白上接了一段CBP-Taq
純化後去鹽濃縮並以水回溶
但總是會有些沉澱
我認為那是蛋白的aggregation
所以打算使用飽和urea (100ul) 單獨對沉澱物去做deaggregation
但是做完之後我想要使用SDS-PAGE確認蛋白
不過由於飽和SDS-PAGE濃度過高
跑膠會糊成一條.....
因此我該如何去除urea
讓我能使用SDS-PAGE確認蛋白呢?
(我有嘗試使用TCA沉澱，不過不知是處理不當還是如何?結果都差不多)
此外
若成功的以urea去deaggregation
我又該如何除去飽和的urea呢?
因為我必須將deaggregation後的蛋白加回原始的清澈液中
使用EK酵素切斷CBP-Tag
感謝各位大大的幫忙>"<
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耶 (十字架)▕ 實┌───────┐(講台上) 耶穌問正在seminar的我
蘇 ● ▕ 驗│ ︿囧︿ │
耶穌：小鬼，你混哪的？怎麼
的 ▔耶▔ ▕ 室│ 我 │
比我被釘的還慘....？
信 ∥ ╭──╮▕ 的└── ╱╲ ──┘╭──╮ 我 ：主啊，我是研究所新生
徒 ╭│偉大│▕ 人 ╔═══╗╭─│去死│
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◆ From: 140.120.9.37
1F：推 rivis:看不懂你的問題，飽和SDS-PAGE濃度是啥？ 08/28 16:18
2F：→ rivis:基本上Urea並不會干擾SDS-PAGE電泳 08/28 16:18
3F：→ rivis:guanidine HCl 才會干擾 08/28 16:19
4F：→ rivis:urea很難去除，要緩慢透析很久，但protein很可能再沈澱下來 08/28 16:21
5F：→ rivis:跑膠會糊糊的可能loading太多了，減量再試試看吧 08/28 16:22
6F：→ rivis:建議你看一下refolding的方法 08/28 16:23
7F：推 ronall:抱歉~打錯了~是飽和SDS-PAGEXDD 08/28 23:56