作者ronall (昵称小公主的!扣十分先)
看板Biotech
标题[问题] 如何去除使用urea去作蛋白的deaggregation
时间Tue Aug 28 12:00:39 2007
饿死抬头
想请教众高手们
小弟使用E.coli生产突变用蛋白
突变蛋白上接了一段CBP-Taq
纯化後去盐浓缩并以水回溶
但总是会有些沉淀
我认为那是蛋白的aggregation
所以打算使用饱和urea (100ul) 单独对沉淀物去做deaggregation
但是做完之後我想要使用SDS-PAGE确认蛋白
不过由於饱和SDS-PAGE浓度过高
跑胶会糊成一条.....
因此我该如何去除urea
让我能使用SDS-PAGE确认蛋白呢?
(我有尝试使用TCA沉淀，不过不知是处理不当还是如何?结果都差不多)
此外
若成功的以urea去deaggregation
我又该如何除去饱和的urea呢?
因为我必须将deaggregation後的蛋白加回原始的清澈液中
使用EK酵素切断CBP-Tag
感谢各位大大的帮忙>"<
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耶 (十字架)▕ 实┌───────┐(讲台上) 耶稣问正在seminar的我
苏 ● ▕ 验│ ︿囧︿ │
耶稣：小鬼，你混哪的？怎麽
的 ▔耶▔ ▕ 室│ 我 │
比我被钉的还惨....？
信 ∥ ╭──╮▕ 的└── ╱╲ ──┘╭──╮ 我 ：主啊，我是研究所新生
徒 ╭│伟大│▕ 人 ╔═══╗╭─│去死│
们=> ○●○●╰──╯▕ 们=> ○●○●○● ╰──╯ www.wretch.cc/album/ronall
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◆ From: 140.120.9.37
1F：推 rivis:看不懂你的问题，饱和SDS-PAGE浓度是啥？ 08/28 16:18
2F：→ rivis:基本上Urea并不会干扰SDS-PAGE电泳 08/28 16:18
3F：→ rivis:guanidine HCl 才会干扰 08/28 16:19
4F：→ rivis:urea很难去除，要缓慢透析很久，但protein很可能再沈淀下来 08/28 16:21
5F：→ rivis:跑胶会糊糊的可能loading太多了，减量再试试看吧 08/28 16:22
6F：→ rivis:建议你看一下refolding的方法 08/28 16:23
7F：推 ronall:抱歉~打错了~是饱和SDS-PAGEXDD 08/28 23:56