作者bioeric (123)
看板Biotech
標題Re: [問題] pGEM不是應該很好接的嗎~!?
時間Sat Aug 25 21:42:38 2007
整個實驗中的關鍵點很多個
1.先檢查看看PCR使用的Polymerase是否不含proofreading能力
最近很多價廉物美的ploymerase 都有proofreasding功能了
拿錯的話 PCR product的末端A就不會加上了
當然拿去與T-vector ligation會摃龜
2.insert與vector的比例
但這點的影響不會大到完全沒半顆成功
3.ligase
ligase是否活性有下降 enzyme這種東西 放久了 活性會有影響
其中ligase buffer中的ATP 影響很大
ATP保存期限很有限
4.Transform的過程
是否過程太激烈 E.Coli死傷慘重
或是compment cell沒做好 效力低
分生這種東西....
運氣佔絕大多數
是用來磨練研究生的心性 老闆的耐性 還有....研究經費的奢侈性
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◆ From: 220.129.171.213
1F：推 wensing:推你最後的三行文字！ 08/26 01:25
2F：推 missoul:大推最末段 08/26 16:57
3F：推 gilchang:Taq不管多便宜，都會在最後加"A"。 08/27 18:23
4F：→ gilchang:當然，如果enzyme不是Taq的話，沒有"A"加上也是可預見的. 08/27 18:23