作者bioeric (123)
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标题Re: [问题] pGEM不是应该很好接的吗~!?
时间Sat Aug 25 21:42:38 2007
整个实验中的关键点很多个
1.先检查看看PCR使用的Polymerase是否不含proofreading能力
最近很多价廉物美的ploymerase 都有proofreasding功能了
拿错的话 PCR product的末端A就不会加上了
当然拿去与T-vector ligation会摃龟
2.insert与vector的比例
但这点的影响不会大到完全没半颗成功
3.ligase
ligase是否活性有下降 enzyme这种东西 放久了 活性会有影响
其中ligase buffer中的ATP 影响很大
ATP保存期限很有限
4.Transform的过程
是否过程太激烈 E.Coli死伤惨重
或是compment cell没做好 效力低
分生这种东西....
运气占绝大多数
是用来磨练研究生的心性 老板的耐性 还有....研究经费的奢侈性
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◆ From: 220.129.171.213
1F：推 wensing:推你最後的三行文字！ 08/26 01:25
2F：推 missoul:大推最末段 08/26 16:57
3F：推 gilchang:Taq不管多便宜，都会在最後加"A"。 08/27 18:23
4F：→ gilchang:当然，如果enzyme不是Taq的话，没有"A"加上也是可预见的. 08/27 18:23